原代心肌细胞间的培养是为了什么？

　　原代心肌细胞间作为主要研究模型广泛应用于心血管研究，经过长期的尝试，我们实验室找到了一些行之有效的方法，积累了一些经验。总结如下：

　　1、细胞分散和接种均匀度

　　分离出来的心肌细胞在溶液中Ca2+的作用下容易结块，因此，在差动贴壁前后，应将心肌细胞轻轻吹吹多次，形成单一分散状态。接种后，心肌细胞应均匀分布在培养板上避免细胞聚集到培养孔中心另外，将培养板放入培养箱后，用滴管轻轻吹每个孔中心部分2~3次，但要特别注意避免污染。

 

　　2、成纤维细胞的抑制和血清类型的选择

　　成纤维细胞比原代心肌细胞间更容易贴壁，具有分裂和增殖的能力。差异粘附后，少量成纤维细胞仍混合在心肌细胞中。如果处理不当，它们很容易长成优势细胞溴脱氧尿苷（BrdU）会干扰细胞有丝分裂，因此BrdU通常用于抑制成纤维细胞的生长，但如果使用胎牛血清培养细胞，则很难BrdU*抑制成纤维细胞的生长，因为胎牛血清中含有许多促有丝分裂因子，使用小牛血清可以克服这种现象，获得90%以上的心肌细胞。

　　3、换液时间

　　观察原代心肌细胞间形态时，接种密度低，贴壁心肌细胞数减少。为避免因更换溶液而丢弃有活力的心肌细胞，接种后48小时应更换溶液，这样不仅贴壁心肌细胞数量明显增加，而且BrdU的作用时间更长，对成纤维细胞的抑制作用更明确此外，其与0.1g?L1BSA对心肌细胞黏附率和凋亡率无显着影响。

　　4、防污染措施

　　除无菌操作等常规技术方法外，还应特别注意以下几点：（1）取心时避免切开消化道较安全的方法是切入剑突上肋，不涉及腹腔，减少污染机会（2）条件允许的情况下，新生大鼠心肌细胞不应与其他细胞在同一培养箱中共培养，以防止交叉污染（3）培养的心肌细胞的观察和拍照每次时间过长，否则不仅会改变培养基的pH值，还会增加污染的概率。