原代细胞分离培养有哪些注意事项？

　　原代细胞分离培养有哪些注意事项？

　　1、组织块培养法

　　（1）接种后的前3天，观察和移动时注意不要引起液体振荡。避免频繁的翻倒和振动，否则组织块不易附着在瓶壁上或附着后脱落飘浮。

　　（2）加入的培养基不宜过多，以免浸泡的组织因轻微波动而脱落。

　　（3）细胞向外迁移时，注意记录并清除漂浮的组织块和残留细胞。它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长。

　　（4）为促进组织块尽快贴在培养瓶上，可在种植前在培养瓶底壁涂上一层薄薄的胶原蛋白。

 

　　2、贴壁原代细胞

　　（1）原代细胞分离培养的分离细胞一次接触体外环境时，会相互影响。这些细胞之间可以产生一些促生长活性物质，促进细胞的存活和生长。如果接种细胞的密度过低，细胞间的促生长作用就很小，细胞分散后很难适应从体内组织环境到独立生存环境的变化过程。如果接种的细胞密度过高，会导致营养供给不足，代谢废物迅速堆积，需要频繁换液和通过。

　　（2）适当提高原代培养接种的细胞密度，为培养细胞提供更多与体内相似的细胞间相互作用，将大大提高原代培养细胞在体外的存活率。当细胞适应体外环境后进行传代培养时，以较低的密度进行接种和培养。

　　（3）接种后的细胞尽快贴壁是培养成功的关键。接种后可将培养瓶放入培养箱中培养3h～5h。待细胞贴壁后，可补充培养基继续培养。

　　3、悬浮型原代细胞

　　（1）原代细胞分离培养细胞必须保持悬浮状态。可以通过增加培养基的粘度来悬浮细胞，例如在培养基中加入低浓度的透明质酸复合物。将培养基加入带搅拌装置的培养容器中，最少5ml，否则搅拌时会产生气泡，对细胞造成损伤。这种方式要注意搅拌速度不要太快，否则培养基会溢出，容易造成污染。如果培养基的量小于5ml，可以使用旋转瓶进行培养。更换悬浮培养细胞溶液时，注意不要吸出细胞。

　　（2）可悬浮培养的细胞一般活力强，体外分裂增殖快，营养物质消耗大，换液时间间隔短。