原代心肌细胞间的培养都有哪些抗污染措施？

　　成纤维细胞比心肌细胞更容易贴壁，具有分裂增殖能力。差异贴壁后，原代心肌细胞间中仍有少数成纤维细胞混杂，如果处理不当，很容易长成优势细胞。溴脱氧尿苷(BrdU)可以干扰细胞有丝分裂，因此BrdU常规用于抑制成纤维细胞的生长。但如果用胎牛血清培养细胞，由于胎牛血清含有很多促有丝分裂因子，BrdU很难抑制成纤维细胞的生长。使用小牛血清可以克服这种现象，获得90%以上的心肌细胞。

　　

　　观察原代心肌细胞间形态时，接种密度低，贴壁心肌细胞数量减少。为了防止存活的心肌细胞随着液体的更换而被丢弃，液体的更换应在接种48小时后进行。这不仅会显著增加贴壁心肌细胞的数量，还会使BrdU需要更长的时间来抑制成纤维细胞。另外，其和0.1gL1BSA能为心肌细胞提供营养支持，但对心肌细胞的黏附率和凋亡率无明显影响。

　　

　　除无菌操作等常规技术方法外，还应特别注意以下几点：获取心脏时，避免切开消化道。比较安全的方法是切开剑突上肋，不涉及腹腔，减少污染机会。在条件允许的情况下，避免新生大鼠心肌细胞与其他细胞在同一培养箱中共培养，防止交叉污染。培养心肌细胞的观察。

　　

　　原代心肌细胞间培养液适宜的pH范围为7.2~7.4。配制和使用培养基时，应注意：

　　

　　1、过滤后pH值会增加0.1~0.3。

　　

　　2、培养基中加入血清后，pH值会降低，降低的程度与血清的质量和含量有关。

　　

　　3、及时更换液体。

　　

　　4、配制好的培养液不宜在4℃下长期保存。这是因为培养液中的CO2会溢出，培养液的pH会升高。每种配制好的培养液应尽可能在2周内用完，否则应部分保存在-20℃下。使用前要补充谷氨酰胺和碳酸氢钠，再次过滤后才能使用。