DNA pull down实验技术

DNA pull down实验技术

1. 实验原理

DNA pull down是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA 片段结合在链霉亲和素磁珠上，再与细胞核蛋白孵育，纯化出与DNA 片段互作的蛋白，洗涤洗脱得到的蛋白产物，做Western blot检测特定蛋白是否与靶DNA 片段结合；做质谱鉴定即可筛选出与DNA 片段可能互作的蛋白信息(如：转录因子、组蛋白等)。

生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用；其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下，与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此用生物素标记核酸后，可以纯化出与该核酸结合的各种生物大分子复合物。

2. 实验流程

1）探针设计及标记：针对靶标区域设计特异性DNA探针，探针经过脱硫生物素标记，跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;

2）Pull down：细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育，靶DNA可以和DNA探针特异性结合，纯化出与靶DNA 片段结合的蛋白复合体，经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除；最后，洗脱得到与靶DNA结合的蛋白质复合物；

3）互作蛋白质鉴定：再经过Western Blot或质谱(MS)鉴定蛋白质。

3. 技术服务

1）DNA探针的设计与合成；

2）细胞培养与核蛋白提取；

3）Pull down捕获互作蛋白；

4）Western blot验证；

4）MS鉴定可能的互作蛋白。

4. 交付结果

1）客观公正的实验原始数据和分析结果；

2）提供详细、完整的实验报告。

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