从哺乳动物细胞或组织分离DNA

材料与仪器：细胞、TBS抽提缓冲液、离心管实验步骤：步骤1：根据样品类型，从下列方法中选一个作为步骤1进行操作。(1)细胞样品①单层培养的细胞以用冰预冷的TBS将单层细胞洗涤2次，用刮棒把细胞刮入约0.5ml的TBS中，将细胞悬液转移到冰浴的离心管中，用1mlTBS冲洗培养皿，并入离心管中的细胞悬液。于4℃以1500g离心10分钟以收获细胞。用5~10倍体积经冰预冷的TBS重悬细胞并再度离心。用TE(pH8.0）重悬细胞，使细胞密度为5x107细胞/ml，转移至一个三角烧瓶中...

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细胞冻存和复苏实验

实验方法原理：细胞冻存和复苏的基本原理是慢冻快解冻，已被证明能最大限度地提高细胞活力。目前常用甘油或二甲基亚砜作为细胞低温保存的保护剂。这两种物质可以提高细胞膜对水的渗透性，再加上缓慢的冷冻可以使细胞内的水从细胞中渗出，减少细胞内冰晶的形成，从而减少冰晶形成对细胞的损伤。复苏细胞时应采用快速熔融的方法，以保证细胞外晶体在短时间内熔融，以避免因水缓慢熔融进入细胞形成细胞内重结晶而对细胞造成损伤。实验材料：细胞试剂、试剂盒：D-Hanks液、小牛血清、培养液、青霉素、链霉素、胰蛋...

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标记细胞株要如何保存？

细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。原代培养物经传代成功后即为细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代，或传代次数有限，可称为有限细胞系，如可以连续培养，则称为连续细胞系，培养50代以上并无限培养下去。所以细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞。从培养代数来讲，可培养到40-50代。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间...

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细胞培养基介绍

细胞培养基的概念01细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境，并提供细胞营养和促进细胞生长增殖的基础物质。细胞培养基是细胞培养的基础，它为动物细胞的健康快速成长提供营养物质。所以，只要用到细胞进行生物技术产品的生产制造，就势必少不了细胞培养基。培养液或培养基，英文都是medium。当它是粉剂时，倾向性地称为培养基，而将粉剂配成液体后，多称为培养液。培养液中常需补加血清、抗生素等成分。细胞培养基的分类02培养基主要有：天然细胞培养基、合成细胞培养基和无血清细胞培养基等。天然...

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C57小鼠皮肤成纤维细胞原代培养的方法

实验方法1.将实验小鼠脱颈处死，75%乙醇浸泡5min，固定，备皮，取背部皮肤至于含双抗的冷PBS缓冲液中。2.仔细剥离脂肪，血管等多余组织，PBS清洗，加胰酶消化1h。3.分离真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。4.将真皮部分于培养皿内剪碎，加入适量胰酶，转移至15ml离心管内，37℃恒温水浴消化1h。5.消化结束后，加入H-DMEM*培养基终止反应，1000rpm离心5min，弃上清。6.PBS清洗一遍，离心弃上清。7.将清洗后的组织块均匀铺于6cm培养皿内，加入2ml*...

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说说关于细胞外泌体研究的几个重要问题

外泌体是细胞分泌到胞外的一种囊泡，其大小为30-150nm，具有双层膜结构和茶托状形态，含有丰富的内含物（包括核酸、蛋白和脂质等），参与细胞间的分子传递。外泌体广泛存在于细胞培养上清以及各种体液中，细胞外泌体研究是近些年研究的热点。细胞外泌体主要原理是根据外泌体的密度、粒径、沉降系数和亲和力等差异进行分离，提取方法包括传统的差速离心、密度梯度离心，以及后来发展的超滤法、聚合物沉淀法、免疫分离、隔离筛选法、体积排阻色谱法等。这些方法各有利弊。细胞外泌体研究常见问题：1、培养细胞...

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SD大鼠乳鼠心脏微血管内皮细胞原代分离培养方法

1.将新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，开胸，取出心脏后于含有双抗的预冷过的D-HANKS中漂洗两遍，移入超净台。2.仔细剪除大血管，左右心房及右心室和室间隔，保留左心室，去除内、外膜，PBS清洗。3.用眼科剪将心室肌剪碎至约1mm3，滴加1ml胎牛血清，均匀接种于6cm细胞培养皿内，组织块间隔1-2mm，放入5%CO2，37℃恒温培养箱内培养。4.4小时后去除培养皿，加入3ml含有20%FBS和1%双抗的H-DMEM培养基，继续培养。5.一般情况下48小时后可见...

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新生SD大鼠大脑皮层神经元原代分离培养方法

一.实验方法1.多聚赖氨酸（Poly-D-Lysine）包被培养板的制备：原代分离进行前一天，用PBS缓冲液配制终浓度为0.1mg/ml的多聚赖氨酸工作液，0.22μm滤膜过滤除菌，于超净工作台内吸取1ml加入六孔板内，确保覆盖板底，静置孵育30min后吸出（可回收反复使用2-3次），用无菌水清洗培养板，置于超净台内晾干，照紫外过夜。2.次日，取出生24h以内的SD大鼠，75%乙醇浸泡消毒5min。3.棉球吸干乳鼠体表的乙醇，迅速断头，浸泡于冰冷的含有2%双抗的PBS缓冲液中...

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