原代心肌细胞间的培养是为了什么？

原代心肌细胞间作为主要研究模型广泛应用于心血管研究，经过长期的尝试，我们实验室找到了一些行之有效的方法，积累了一些经验。总结如下：1、细胞分散和接种均匀度分离出来的心肌细胞在溶液中Ca2+的作用下容易结块，因此，在差动贴壁前后，应将心肌细胞轻轻吹吹多次，形成单一分散状态。接种后，心肌细胞应均匀分布在培养板上避免细胞聚集到培养孔中心另外，将培养板放入培养箱后，用滴管轻轻吹每个孔中心部分2~3次，但要特别注意避免污染。2、成纤维细胞的抑制和血清类型的选择成纤维细胞比原代心肌细胞间...

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细胞培养基给了体外细胞“一个家”

细胞培养基是人工模拟动物体内细胞生长环境，维持细胞体外存活和增殖的营养基础。它的主要功能是为细胞提供合适的pH值和渗透压，以及细胞自身不能合成的各种营养物质。细胞培养基系列产品包括旨在支持和维持细胞系生长的产品，适用于多种哺乳动物细胞和细胞系，经过长时间的测试和验证。我们开发的即用型培养基产品包括粉末和浓缩物，可以满足您的实验设施和预算的双重需求。培养基中特别添加了能有效改善细胞生长状态的营养成分和针对不同物种特选的优质培养基，适用于各种干细胞的体外培养。1、预先加入稳定形态...

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双荧光素酶报告基因检测

双荧光素酶报告基因检测荧光素（Luciferase）是自然界中能够产生生物发光的酶的统称，其中萤火虫荧光素F-Luciferase和海肾荧光素R-Luciferase具有代表性。研究者利用荧光素酶开发出一套极其灵敏且使用方便的基因报告系统。目前，双荧光素酶通常是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素。这两种酶的主要区别：1.物种来源不同；2.它们的底物和辅因子不同；3.发光的颜色不同。萤火虫萤光素酶是一种胞内蛋白，从甲虫（Photinuspyralis）中分离得到，大小为61KDa。在...

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原代心肌细胞研究要注意些什么？

作为主要的研究模型，原代心肌细胞被广泛应用于心血管研究。那么我们在研究过程中都要注意些什么呢？1、新生鼠年龄的选择新生鼠心肌细胞在出生后3天内具有部分增殖能力，而成年鼠心肌细胞为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力。因此，大鼠出生时间越短，离体心肌细胞存活率越高，越容易贴壁。大量观察表明，选择1～3日龄大鼠分离心肌细胞进行原代培养是理想的，尤其是半日龄大鼠。2、消化酶的选择和使用新生大鼠原代心肌细胞间可采用组织块法和消化法分离。前者较少使用，因为难以获得密度均匀的细胞和控制成纤...

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一文带你全面了解细胞因子

一文带你全面了解细胞因子一、细胞因子的概念细胞因子（cytokine，CK），是由免疫细胞（如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等）和某些非免疫细胞（内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等）经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质（多肽或糖蛋白）。细胞因子的发现历史1957年，发现干扰素（interferon，IFN）1969年，提出淋巴因子（lymphokine）的概念1974年，定名细胞因子（cytokine，CK）1975年，命名了肿瘤坏死因子（Tumo...

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RNA pull down实验技术

RNApulldown实验技术1.实验原理RNApulldown是体外研究RNA与蛋白互作的重要技术。该技术是用生物素标记体外转录的靶RNA分子，再用链霉亲和素纯化出与靶RNA结合的蛋白复合体，洗脱得到RNA结合蛋白质。再通过westernblot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与靶RNA结合；或通过质谱仪检测可以筛选出与靶RNA结合的蛋白。生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用；其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下，与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此...

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DNA pull down实验技术

DNApulldown实验技术1.实验原理DNApulldown是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上，再与细胞核蛋白孵育，纯化出与DNA片段互作的蛋白，洗涤洗脱得到的蛋白产物，做Westernblot检测特定蛋白是否与靶DNA片段结合；做质谱鉴定即可筛选出与DNA片段可能互作的蛋白信息(如：转录因子、组蛋白等)。生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用；其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下，与已知的几乎...

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GST pull down实验技术

GSTPulldown实验技术1.实验原理Pulldown技术是将"诱饵"蛋白与一种易于纯化的配体标签（如：GST标签、His标签）进行融合表达，而带标签的诱饵蛋白能被特异结合该标签的固相亲和配基捕获，形成"次级亲和支持物"，用于纯化与诱饵蛋白相互作用的其他蛋白。纯化产物洗脱后，经Westernblot验证或LC-MS/MS，即鉴定与诱饵蛋白互作的蛋白。1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-转移酶（GST）融合标签从细菌中一步纯化出GST融合蛋白。从此，GST融合蛋白在蛋白...

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